杰论系列 | CTC-iFISH检测在肿瘤体液活检中的临床意义与应用

循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cell, CTC)即为脱落入血的实体瘤上皮细胞，与肿瘤转移、耐药、预后及复发等有着极大的相关性。大部分的循环肿瘤细胞的表面表达上皮细胞黏附分子(epithelial cell adhesion molecule,EpCAM)，所以有些方法使用EpCAM直接捕获CTC。但近年来的大量研究已证明 EpCAM 的表达有相当大的异质性，不同组织来源的细胞，甚至同一肿瘤组织内的细胞在治疗前后其 EpCAM 的表达量都有很大不同，从而使得依赖于 EpCAM 捕获 CTC 的方法具有极大的不确定性，甚至完全不可捕获性。差相富集技术(Subtraction Enrichment, SE)完全不依赖于肿瘤细胞表面标志物（如EpCAM）的表达，应用偶联了抗人白细胞表面抗原的特殊单克隆抗体组合群的免疫磁微粒及用于分离非血源性细胞的特殊离心介质快速高效去除肿瘤病人血液中的红细胞、白细胞及血浆蛋白，从而有效富集病人外周血标本中的循环稀有细胞——包括来源于所有不同组织实体瘤的循环肿瘤细胞、循环血管内皮细胞、干细胞等。获取的肿瘤细胞既没有被磁珠所包裹，亦没有与任何抗肿瘤细胞表面标志物（如EpCAM）的抗体相结合，从而避免了激活细胞内的信号传导通路。 不同于其它常规方法，本实验过程中红细胞的去除避免了低渗裂解法的使用，从而对富集的肿瘤细胞的损伤降至最低，使得获取的靶细胞维持了良好的自然状态及细胞形态，可以应用于后续一系列形态学与功能性研究。如免疫荧光染色-染色体荧光原位杂交(iFISH)，蛋白表达等，并可对借助显微切割技术获取的单个肿瘤细胞进行基因分析。

免疫荧光染色-染色体荧光原位杂交(iFISH) 在区分血源性与非血源性细胞的基础上，首次将免疫荧光染色与染色体荧光原位杂交技术成功整合为同步实施的免疫荧光染色-染色体荧光原位杂交技术平台(Tumor Marker immunostaining-FISH, TM-iFISH)，在区分血源性细胞的同时，可有效鉴别循环血管内皮细胞(CEC)和循环肿瘤细胞(CTC)，从而极大地增加了 CTC 检测的特异性。通过 iFISH 方法检测到的 CTC 细胞可适用于后续一系列基因、蛋白或其它相关功能的单细胞或多细胞等方面的研究。

CTC-iFISH肿瘤液体活检在不同治疗阶段具有不同的临床意义： （1）早期诊断、辅助诊断、基线预后；（2）新辅助化疗；（3）手术及治疗前后的CTC动态变化；（4）检测MRD的复发情况等。

图1：在同一CTC细胞上原位检测染色体数目异常及HER2和PD-L1瘤标表达

图2：迈杰医学CTC-iFISH染色图片示例，共检测到20个循环肿瘤细胞和0个循环肿瘤细胞团

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