杰论系列 | 分子检测实验室的防污染控制

1、样本间交叉污染

样本制备时的污染，如使用未消毒的刀片进行批量样本的连续切片；收集血液的采血管被污染或管塞密封不严导致血液外溢；样本移液操作时忘记更换枪尖或未使用带滤芯枪尖；移液器等实验器具及离心管，枪头等一次性耗材等未及时充分灭菌；样本开盖、高速离心、剧烈震荡、反复吹吸时逸散形成气溶胶等。

2、实验试剂污染

3、扩增产物污染

这是PCR 反应中最主要最常见的污染问题。因为PCR产物拷贝量大，远远高于PC检测数个拷贝的极限，所以极微量的 扩增 产物污染，就可形成假阳性 环境 。

1、严格执行各区功能划分

• 试剂准备区进行试剂的制备、分装和反应混合液的制备。本区为洁净区，存放于此区域的试剂转出后，不可逆行由后续操作的区域进入。尤其要注意的是，试剂盒中的阳性质控品不能储存在该区。
• 样本准备区为半污染区，是最容易发生交叉污染的功能区。在本区进行核酸提取与浓度纯度定量测定。其他功能区可在超净工作台中进行操作，但在样本准备区必须配制生物安全柜。
• 文库制备区为半污染区，用于文库的构建。杂交捕获、扩增子法等文库制备方法均有通过PCR放大文库产量的步骤，因此应在文库制备区构建文库，纯化等后续操作应待将文库扩增产物传递至功能区再进行。另外，对组织样本做片段化处理时应在单独划分的区域中进行。
• 杂交捕获区为半污染区，用于文库扩增后的纯化，以及后续的二次扩增或捕获富集等步骤。此区域容易发生扩增产物及气溶胶等对其它区域的污染，尽量避免人员、物品等在该区与其它功能区之间流动。
• 文库扩增区为半污染区，对杂交捕获产物进行PCR扩增富集，并对上机测序前的文库进行质控、上机前的稀释混样。
• 测序分析区为半污染区，用于文库的上机测序。
• 电泳区为半污染区，用于核酸样本质量和文库片段的凝胶电泳、毛细管电泳等分析。

2、清洁的实验用品

3、正确的实验操作

4、规范的实验设计

图1：近3个月多基因突变丰度趋势图

1、核酸样本溢出时

立即用吸水纸覆盖，由外围向中心倾倒1 0%的次氯酸消毒剂，约半小时 后，清除污染物品，再用 次氯酸消毒剂擦拭，并用 75%酒精喷洒，紫外车照射1 - 2小时。

2、出现不明情况污染时