杰论系列 | 生物样品分析中如何进行重新分析：指南与最佳实践-迈杰转化医学

杰论系列 | 生物样品分析中如何进行重新分析：指南与最佳实践

返回列表 来源：发布日期： 2023.11.30

前言

在生物样品分析中，经常会因为各种原因进行重新分析。在哪些理由下可以进行重新分析，哪些理由下不能进行重新分析，重新分析过程如果记录，重新分析结果如何报告等都是生物分析人员需要关注的问题。 本文梳理了相关的法规指南和最佳实践，实验室管理者可以此为依据根据实际情况建立特定实验室的重新分析标准操作规范。

一、9012指南

在2020版中国药典的9012生物样品定量分析方法验证指导原则中，对生物样品重新分析有如下规定：

应该在实验计划或标准操作过程中预先确定重新分析试验样品的理由以及选择报告值的标准。在试验报告中应该提供重新分析的样品数量以及占样品总数的比例。

重新分析试验样品可能基于下列理由：

由于校正标样或质控样品的准确度或精密度不符合接受标准，导致一个分析批被拒绝；
内标的响应与校正标样和质控样品的内标响应差异显著；
进样不当或仪器功能异常；
测得的浓度高于定量上限，或低于该分析批的定量下限，且该批的最低浓度标样从标准曲线中被拒绝，导致比其他分析批的定量下限高；
在给药前样品或安慰剂样品中测得可定量的分析物；
色谱不佳。

在由于给药前样品阳性结果或者由于药动学原因进行重新分析的情况下，应该提供重新分析样品的身份、初始值、重新分析的理由、重新分析获得值、最终接受值以及接受理由。

在仪器故障的情况下，如果已经在方法验证时证明了重新进样的重现性和进样器内稳定性，则可以将已经处理的样品重新进样。但对于拒绝的分析批，则需要重新处理样品。

二、 M10指南

在ICH协调指导原则M10生物分析方法验证及样品分析2022终稿版中，对生物样品重新分析的规定与9012指南大体相当，将其中有差异的地方罗列如下：

除了9012指南第1条中包括的各个条目，研究样品分析开始前，应该在方案、研究计划或SOP中预先规定重新分析研究样品的重复次数。

除了9012指南第2条中列举的各个重新分析理由外，研究样品重分析的理由还可以是：

稀释后的研究样品浓度低于LLOQ；
为受试者安全性调查而进行重新分析。

除了9012指南第3条中要求提供的各项信息，还要求将这些信息汇总成表，并增加针对每种原因重新分析的样本总数的汇总表。

在9012指南第4条的基础上，M10指南还强调了仅仅因为校正标样或质控样品失败，而没有任何确定的分析原因，就重新进样一个完整的分析批或个别校正标样或质控样品是不可接受的。

除了对9012指南条目的增补外，M10指南还对重新分析做了如下规定：

对于正在分析多种待测物的研究样品，如果其中一种待测物不符合接受标准，不应拒绝另一种待测物的有效结果。
首次分析结果无法报告的情况下，认为单次重分析是足够的（例如浓度高于ULOQ或仪器故障）。在需要对检测结果进行确认情况下（例如给药前样品具有可测量浓度），如果样品体积足够，则可以进行重复测定。
如果生物样品为复孔检测，由于一个孔的结果未能达到预定义的接受标准（例如，复孔间差异较大，其中一个孔的浓度高于ULOQ或低于LLOQ）而获得不可报告的值。

三、FDA指南

9012指南和M10指南是必须执行的法规要求，除此之外，FDA在2018年发布的Bioanalytical Method Validation Guidance for Industry也是业界经常使用的指南 。FDA指南对重新分析的规定相对简单，提供了两张表格可供参考，相关规定基本与9012指南和M10指南一致。

Table 1. Recommendations and Acceptance Criteria for Bioanalytical Method Validation and In-Study Conduct

表1. 验证与样品分析中的建议与可接受标准

resource/images/ad334ef4997943719983751f08ac203f_6.png

Table 2. Documentation and Reporting

表2. 记录与报告

resource/images/ad334ef4997943719983751f08ac203f_8.png

四、GBC最佳实践

在实验室实践中，9012，M10和FDA等指南仍嫌不够具体。全球生物分析联盟（Global Bioanalysis Consortium，GBC）在2013年组织了一个由多国专家组成的协调小组，专门就生物样品重新分析等若干问题进行了讨论。 讨论结果以“Repeat Analysis and Incurred Sample Reanalysis: Recommendation for Best Practices and Harmonization from the Global Bioanalysis Consortium Harmonization Team”为标题发表在2014年的American Association of Pharmaceutical Scientists杂志上，为生物分析从业者提供了最佳实践。该小组的中方成员钟大放研究员就是中国药典9012指南的起草人。

GBC最佳实践中提供了生物样品重新分析的流程 ，重新分析可按原因分为两大类：

第一类为“分析原因”或“可确定原因”的重新分析

原因：包括仪器功能异常，质控品不符合接受标准，检测结果超过定量限等，已在9012指南中予以概括，这种情况下应以第一次有效的重新分析值作为最终报告值。

第二类为“结果不一致”或“药代动力学”原因的重新分析

原因可能包括但不限于以下方面 ：（1）空白对照样品或安慰剂样品出获得可测量的浓度结果；（2）在浓度-时间曲线的中部出现低于定量限的浓度结果；（3）疑似的样本混淆等。这些原因需要得到标准操作程序或实验室调查的支持，说明理由并保留纸质记录。所有的重新分析都需要在分析数据锁库前进行。

第二类重新分析必须设置复孔检测，获得两个复孔检测结果后，首先考察复孔间结果的一致性。一致性接受标准为：两复孔结果差值的绝对值要小于两复孔结果平均值的30%。对配体结合法，该标准可放宽到40%。

复孔结果的一致性通过后，取初次分析值，两个重新分析复孔值共三个值的中值做为最终汇报值。如果初次分析值低于定量下限，则汇报复孔值中较小的值。
如果复孔结果一致性无法通过，则拒绝重新分析的结果，或者再次进行重新分析，或者在样本量不足的情况下以“无结果 NR”进行汇报。

当复孔结果不能以数值形式汇报时（如超过定量限），按如下方式取值汇报：

如果两个复孔结果都低于定量下限，汇报“低于定量下限，BLQ”；
如果两个复孔结果都高于定量上限，则重新稀释样本进行下一次重新分析，如果样本量不足，报告“NR”；
如果两个复孔结果，一个有数值形式，一个超出定量限。由实验室组织技术专家讨论，以科学性为原则在3个值中选择一个值进行汇报，或汇报“NR”。并出具纸质说明，表明选值的明确理由。
如果没有足够的样本量进行复孔检测，只能进行单次重新分析。则将初次分析值和重新分析值按前述公式进行一致性分析，如果一致性通过，汇报平均值，如果一致性不通过，则进行专家讨论后取值汇报，或汇报“NR”。同样需出具取值理由说明。